2.1.2 MATERIAL Y EQUIPO DE LABORATORIO

Para el desarrollo de la investigación y docencia, en el campo del cultivo de tejidos, se requieren de materiales que permitan la preparación de fórmulas nutrimentales con el objetivo de cultivar tejidos, órganos y células vegetales in vitro. Es muy importante que los materiales y equipos de uso común en el laboratorio se identifiquen por su nombre correcto y uso especifico que tiene cada uno, pero más importante es saber manejarlo correctamente en el momento oportuno, teniendo en cuenta los cuidados y normas especiales para el uso de aquellos que así lo requieran.

2.1.1.4 Área de incubación (Tarea)

Es el área de incubación de los cultivos, donde las condiciones ambientales óptimas cambiarían según las especies en cultivo, por lo tanto se debe tener en cuenta las variaciones de luz, la humedad relativa y el fotoperiodo.

§  La temperatura se controla con un equipo de aire acondicionado o con calentadores. Según el cultivo, la temperatura promedio de un cuarto de incubación varia alrededor de 25°C +/- 2°C.

§  La humedad relativa es controlada indirectamente por los equipos de aire acondicionado. Si la humedad relativa decae debajo de 50%, se producirá una pérdida de agua de los medios de los cultivo y la concentración de las sales minerales aumentara, en detrimento de los cultivos. El promedio es entre 60 y 70% de la humedad relativa.

§  La fuente de luz está dada por lámparas fluorescentes y el fotoperiodo es controlado por un marcador horario. Las lámparas fluorescentes tienen ventaja sobre las lámparas incandescentes por que tienen una mejor calidad de luz, distribuyen la luz uniformemente y emiten menos calor. Los cultivos requieren entre 500 3000 lux, y otra oscuridad.

§  La disposición de los estantes en los que se ponen los frascos o tubos con los cultivos variara según las dimensiones de la habitación.

§  La dimensión de los estantes puede variar, una plataforma de incubación de 0.45 x 0.90 m, con una altura de 0.30 m, entre plataformas es aconsejable por que permiten una buena iluminación, acceso y control a los materiales.

Bibliografía

¡ Ing. Ms. María Elena Montes. Laboratorio de Cultivo de Tejidos Vegetales. (en línea). Universidad Católica de El Salvador. Acreditada 2007-2012   

2.1.1.3 Área de siembra aséptica (Tarea)

En esta área del laboratorio se realiza el trabajo de escisión, inoculación y transferencia de los explantes a los medios de cultivo. Dado que este trabajo el más alto nivel de limpieza ambiental, se recombina la instalación de gabinetes de flujo horizontal o vertical de aire filtrado de baja presión, o la construcción de cuartos de transferencia. Sin embargo ciertas operaciones de inoculación como la escisión y el cultivo de ápices y meristemos en tubo de ensayo de boca angosta, se pueden realizar sobre una mesa  limpia, ubicada en un lugar del laboratorio libre de corrientes de aire y polvo. Los gabinetes de flujo laminar deben ubicarse, en lo posible, en un lugar alejado de las puertas y con un mínimo de corriente de aire, con el fin de prolongar la vida útil de los filtros.  

Bibliografía

Ë Ing. Ms. María Elena Montes. Laboratorio de Cultivo de Tejidos Vegetales. (en línea). Universidad Católica de El Salvador. Acreditada 2007-2012   

2.1.1.1 Área de preparación de medios de cultivo y esterilización (Tarea)

La sección destinada para el lavado debe contar con un lavado grande (de acero inoxidable, resistencia a ácidos y álcalis), agua corriente, mesas que permitan trabajar a pie y anaqueles para secar y guardar el material lavado. El área preparación de medios debe estar equipada con una refrigeradora para guardar los productos químicos y soluciones utilizadas en los medios de cultivo: balanzas, un potenciómetro, una cocina, un mezclador de medios, un destilador de agua y la autoclave u olla de presión. Estos dos últimos equipos deben estar lo más cerca posible del lavadero. Opcionalmente se usa estufa para secar los materiales.

Se utiliza principalmente para preparar los medios de cultivo, pero debe proveer también un espacio para almacenar los materiales de vidrio y de plástico, y los reactivos químicos. Este ambiente debe contar con mesas de trabajo para la preparación de los medios y colocar las balanzas, el medidor de pH, los platos calientes con agitación, y otros elementos; también debe incluir vitrinas, estanterías y espacio para el equipo de refrigeración, y para la incubadora o la cámara de crecimiento.

El área de lavado debe incluir por lo menos un lavadero grande con agua caliente y agua fría y una fuente de agua de alto grado de pureza, preferiblemente agua doblemente destilada, y también debe proveer basureros adecuados para el material vegetal, inorgánico y de vidrio que se deseche. El área de eterización debe tener espacio para la autoclave vertical y horizontal, el cual puede ser pequeño (olla de presión) o grande (de carga frontal y de enfriamiento lento y rápido), según sea el volumen del material que se procese. Esta área puede incluir espacio para estufas, secadores y un lavadero con agua caliente y fría.

Bibliografía

m FAO. Cultivo de tejidos vegetales: principios básicos, metodología y técnicas. (2012), (en línea).

2.1.1 Aéreas del laboratorio de cultivo de tejidos (Tarea)

v Área de preparación.

v Área de lavado y esterilización.

v Área de transferencia

v Área de incubación

v Área de observación y examen

v Área de crecimiento

v Área de cuarentena y de control fitosanitario   

Bibliografía

r FAO. Cultivo de tejidos vegetales: principios básicos, metodología y técnicas. (2012), (en línea)

2.1 Medios de cultivo (Tarea)

El laboratorio de Cultivo de Tejidos Vegetales se dedica a la micropropagación comercial de plantas a empresas o productores particulares; así como también a la investigación.  

Dependiendo del grado de preservación de la estructura del tejido u órgano de origen y del tiempo de su duración distinguimos diferentes tipos de cultivos: de órganos, explantes, primarios, secundarios, etc. 

Bibliografía

è J.M García. Introducción al cultivo de tejidos (en línea). Citado 08 de julio de 2012

Unidad 2