GELIFICANTES
El gelificante suele ser un sólido que al añadirse a un medio de cultivo
se disuelve por calentamiento fuerte (cercano a los 100 ºC) y hace que el medio
adquiera la consistencia de gel al enfriarse a temperaturas menores. Uno de los
mejores agentes gelificantes de que se dispone para realizar cultivos in vitro
de tejidos vegetales es el agar, también conocido como agar-agar.
Los
gelificantes deben cumplir con una serie de requisitos: no ser asimilado por el
explanto, lo que haría que al consumirse el medio retornase a su estadio
líquido, no interferir en la absorción de los nutrientes del medio de cultivo,
y permanecer estable durante el tiempo de cultivo.
Entre los compuestos alternativos al agar para utilizarse como
gelificantes en el cultivo in vitro de tejidos vegetales tenemos:
• Alginatos. Excelentes para cultivo de células en suspensión y de
protoplastos.
• Agarosa. Es uno de los polímeros del agar, obteniéndose a partir de
él. Se utiliza más en electroforesis de proteínas o ácidos nucleicos que en
cultivo in vitro.
• Fitagel. Conocido también con el nombre gelrita, marca registrada de
Merck; es de amplio uso.
• Ficoll. Es un derivado de polisacáridos que produce medios de cultivo
de tipo coloidal. Encuentra una aplicación importante en el cultivo de anteras.
El fitagel es un polisacárido aniónico obtenido por fermentación
bacteriana. El gel qué forma se caracteriza principalmente por:
• Gran transparencia, que facilita el seguimiento del cultivo.
• El medio nutritivo se gelifica con un aporte de fitagel de tan sólo el
0.2%
• Precisa de cationes divalentes para su gelificación, principalmente Mg
o el Ca.
• Se disuelve y gelifica en respuestas a cambios de temperaturas, como
el agar, si bien no es termoreversible.
• Los explantos cultivados en medios con fitalgel absorben los
nutrientes con mucha facilidad, lo que permite un crecimiento mas rápido, sin
embargo la velocidad de absorción puede ser excesiva, no pudiendo incorporarse
a sus estructuras y compuestos sino que quedarían en solución dentro del
explanto, causando el problema conocido típicamente como hiperhidricidad,
frecuente en cultivos de tipo leñoso.
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