El procedimiento
de la disección del explante comienza
1.- Cosecha de los brotes (1-2 cm de longitud) de
las raíces de almacenamiento o retoños o de los brotes establecidos. Es esencial
contar con material limpio para la siembra. Las plantas patrón deberán mantenerse
en la cámara de crecimiento y se someterán periódicamente a medidas de control
de plagas.
2.- Colocar las
puntas de brotes cortadas sobre papel filtro humedecido o sobre toallas de
papel, para evitar su deshidratación.
3.- Quitar todas
las hojas de las puntas a excepción de las más pequeñas.
4.- Esterilizar
superficialmente las puntas de brotes mediante inmersión en una solución que
contenga 5 % (v/v) de blanqueador comercial (aproximadamente 0.525% de hipoclorito
de sodio) y dos gotas/100 ml de Tween-20, durante 10-15 minutos.
5.- En ambiente a séptico,
enjuague las puntas de los brotes tres veces en agua destilada estéril.
6.- Trasladar
las puntas de los brotes a una caja de petri forrada con papel filtro humedecido.
7.- En una
campana de flujo laminar o en otro ambiente estéril y adecuado, y con ayuda de
un microscopio de disección, recortar las hojas jóvenes restantes doblándolas
hacia atrás y alejándolas del tallo. Durante este paso del procedimiento de
aislamiento del explante, el ápice del brote se toma con un par de pinzas de
punta fina mientras que las hojas se cortan con un bisturí.
8.- Remover
cuidadosamente el primordial foliar así: bordee la cúpula meristematica mientras
los raspas con el lado cortante del bisturí, hasta que solo quede la cúpula meristematica.
9.- Utilizando
el bisturí, levantar el meristemo separándole de los tejidos subyacentes y
colocar inmediatamente en el medio de cultivo.
BIBLIOGRAFIA
- http://webapp.ciat.cgiar.org/biotechnology/cultivo_tejidos/capitulo18_parte2.pdf
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